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紫外可見分光光度計：操作流程與注意事項

更新時間：2025-08-22      點擊次數(shù)：121
掌握紫外可見分光光度計的正確操作方法和注意事項，是確保測量結(jié)果準確可靠的關鍵。無論是科研實驗還是工業(yè)檢測，規(guī)范的操作流程能有效減少誤差，延長儀器使用壽命。本文將詳細介紹紫外可見分光光度計的標準操作步驟及日常使用中的核心注意要點。
一、操作前的準備工作
在啟動儀器進行正式測量前，充分的準備工作是基礎。首先需檢查儀器的電源線、數(shù)據(jù)線等連接是否牢固，確保儀器處于正常的供電狀態(tài)。同時，要確認實驗室環(huán)境符合儀器使用要求：溫度應控制在 15 - 30℃之間，相對濕度保持在 45% - 80%，避免強光直射、劇烈震動和腐蝕性氣體侵蝕儀器。
樣品準備是關鍵環(huán)節(jié)之一。液體樣品需保證均勻無沉淀，若存在懸浮物應通過過濾或離心處理去除，否則會導致光散射干擾，影響吸光度測量準確性。對于易揮發(fā)或不穩(wěn)定的樣品，應使用密封樣品池，并盡快完成測量。固體樣品需制成均勻的溶液或薄膜，確保樣品在測量波長范圍內(nèi)有適當?shù)奈铡?/span>
選擇合適的樣品池同樣重要。根據(jù)測量波長范圍挑選材質(zhì)：可見光區(qū)（400 - 800nm）可選用玻璃樣品池，紫外光區(qū)（100 - 400nm）必須使用石英樣品池，因為玻璃會吸收紫外光。樣品池的光程需與實驗要求匹配，常用的有 10mm、5mm 和 2mm 等規(guī)格，高濃度樣品適合選擇短光程樣品池，低濃度樣品則需使用長光程樣品池以提高檢測靈敏度。使用前需用去離子水或樣品溶劑清洗樣品池 2 - 3 次，去除殘留雜質(zhì)。
二、標準操作流程

  1. 開機預熱：打開主機電源，部分儀器需單獨開啟光源開關（如氘燈和鎢燈）。按照儀器說明書要求進行預熱，通常預熱時間為 20 - 30 分鐘，確保光源和檢測器達到穩(wěn)定狀態(tài)。預熱過程中不要頻繁開關儀器，以免影響光源壽命和儀器穩(wěn)定性。

  1. 設置測量參數(shù)：通過儀器操作面板或配套軟件設置測量模式（吸光度、透射率或濃度）、測量波長或波長掃描范圍。選擇波長時需參考樣品的吸收特性，定性分析通常需要掃描全波長范圍（如 190 - 800nm），定量分析則應選擇樣品的最大吸收波長，以提高測量靈敏度和準確性。例如測量蛋白質(zhì)樣品時，常選擇 280nm 作為特征波長。

  1. 空白校正：空白校正的目的是消除溶劑、樣品池和環(huán)境光等因素的干擾。將裝有空白溶液（與樣品溶劑相同）的樣品池放入樣品室的參比光路，確保樣品池的透光面正對光路。在儀器上執(zhí)行空白校正操作，使儀器在當前波長下顯示吸光度為 0 或透射率為 100%。每次更換波長或測量條件后，都需要重新進行空白校正。

  1. 樣品測量：將處理好的樣品溶液裝入樣品池，用擦鏡紙輕輕擦拭樣品池外壁，去除指紋和液滴，避免影響光路通透。將樣品池放入樣品室的樣品光路，關閉樣品室蓋。點擊測量按鈕，儀器會自動顯示或記錄測量結(jié)果。每個樣品建議測量 2 - 3 次，取平均值作為最終結(jié)果，減少偶然誤差。

  1. 數(shù)據(jù)記錄與處理：測量完成后及時記錄數(shù)據(jù)，現(xiàn)代儀器可通過軟件自動保存光譜圖和測量值。如需計算濃度，可在軟件中輸入標準曲線參數(shù)或通過標準溶液建立校準曲線，儀器會根據(jù)比爾 - 朗伯定律自動計算樣品濃度。測量結(jié)束后，依次關閉光源、主機電源，整理實驗臺面。

三、關鍵注意事項

  1. 儀器維護保養(yǎng)：光源有一定的使用壽命，氘燈通常為 500 - 2000 小時，鎢燈為 1000 - 3000 小時，達到使用壽命后需及時更換。定期清潔樣品室，去除灰塵和灑落的樣品，可用軟毛刷或蘸有乙醇的棉簽輕輕擦拭。長期不用儀器時，應每周開機預熱一次，防止光學元件受潮發(fā)霉。

  1. 樣品池使用規(guī)范：拿取樣品池時必須捏住磨砂面，避免接觸透光面，防止指紋污染影響透光率。樣品池使用后應立即用去離子水清洗干凈，倒置晾干后存放于專用盒中，避免碰撞損壞。有劃痕或破損的樣品池應及時更換，以免影響測量精度。

  1. 誤差控制措施：測量過程中應避免樣品池放置位置偏移，確保每次測量時光路對準一致。高濃度樣品可能偏離比爾 - 朗伯定律的線性范圍，需進行稀釋后再測量，稀釋時應使用移液槍準確移取，確保稀釋倍數(shù)精確。環(huán)境溫度變化會影響溶液的折射率和儀器穩(wěn)定性，測量過程中應盡量保持溫度恒定，特別是對于溫度敏感的樣品。

  1. 安全操作要求：儀器運行時不要打開樣品室蓋，防止紫外光直接照射眼睛和皮膚。使用揮發(fā)性有機溶劑作為樣品溶劑時，需在通風櫥內(nèi)操作，避免溶劑揮發(fā)進入儀器內(nèi)部損壞電子元件。實驗結(jié)束后妥善處理廢液，遵守實驗室安全規(guī)范。